北京博迈德基因技术有限公司(官方网站)
  • 产品中心
  • 核酸纯化
  • PCR相关
  • DNA分子量标准
  • 克隆相关产品
  • 感受态细胞
  • 蛋白质相关产品
  • 电泳相关产品
  • 转染相关产品
  • 即用型试剂/生化试剂
  • 抗体
  • 质粒
  • 仪器
  • 技术服务
  • 实验技术服务
  • DNA测序服务
  • DNA合成服务
  • 全基因合成
  • 订单下载
  • 无缝克隆在线引物设计
  • 操作指南
  • 技术讲座
  • 在线视频
  • 售后服务
  • 资料下载
  • 软件下载
  • 目录册下载
  • 订单下载
  • 报价表下载
  • 联系我们
  • 产品中心

    Product Center

    大肠杆菌

    NUCLEIC ACID PURIFICATION

    【新品】dam-/dcm-感受态细胞

    发布者:博迈德生物发布时间:2019-12-243706

    货号
    产品名称
    规格
    价格(元)
    说明书下载
    BC122-01
    【新品】dam-/dcm-感受态细胞
    20×100ul
    420

    储存条件:-70℃保存,避免反复冻融。不适合在液氮中保存。

    产品介绍:

    本公司生产的dam-/dcm-感受态细胞是采用大肠杆菌dam-/dcm-菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。dam-/dcm-菌株来源于大肠杆菌K12菌株,该菌株为damdcm甲基化酶失活突变型菌株,常用于质粒DNA的去damdcm甲基化处理,消除damdcm甲基化对酶切的影响。核酸内切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高质粒DNA的产量和质量。甲基化酶的失活突变可能会导致质粒DNA在该菌株中会出现突变,不建议连接产物的转化实验,仅用于质粒转化。菌株还具有抗T1噬菌体感染的特点。pUC19质粒检测转化效率>×106 cfu/μg DNA

    基因型ara-14 leuB6 fhuA31 lacY1 tsx78 glnV44 galK2 galT22mcrA dcm-6 hisG4 rfbD1 R(zgb210::Tn10) TetS endA1 rspL136 (StrR)dam13::Tn9 (CamR) xylA-5 mtl-1 thi-1 mcrB1 hsdR2

    菌株抗性:对氯霉素、链霉素有抗性;对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素和四环素敏感。

    质粒转化步骤

    1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入1-5μl含有1-100ng的质粒DNA到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀。

    2.冰水浴中放置30分钟,不要晃动。

    3.42℃热击60秒钟,不要晃动。

    4.冰水浴中放置2分钟,不要晃动。

    5.加入500μl的室温SOCLB培养基。

    6.置于37℃摇床中,150-200rpm震荡复苏培养60分钟。

    7.50-100μl菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液体吸干后,倒置平板,37℃培养12-18小时。

     

    平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm离心30秒钟,弃掉上清,留100μl左右的液体,用200μl吸头轻轻吹打散菌块,取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化,连接产物转化最好用涂布法。)

     

    质粒快速转化步骤:将步骤2的时间缩短到5分钟,对于氨苄青霉素抗性的质粒,步骤4完成后,可直接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的LB平板上。其它抗性的质粒仍需60分钟的复苏培养。)


    联系我们